RSS

【转载】原核表达遇到瓶颈怎么办

原核表达的看过来,总会有点启发。

我想表达遇到的第一个瓶颈估计就是为什么我的外源片段插到载体里面,PCR鉴定没问题,双酶切也OK,可是就是不见表达。一般我们是如何判断没有表达呢?大多都是首先进行SDS-PAGE。在跑胶的时候一定要设对照,比较严谨的电泳对照,应该是:Marker,标准品阳性对照(如果有,且打算做Western的话),以及空白载体(诱导)和重组载体(不诱导)2个阴性对照,再加上诱导不同时间的表达结果。Marker用于判断条带大小,标准品用于判断Western体系包括抗体显色剂和操作的可靠性,以及精确判断大小;空白载体(诱导)负对照有助于判断在非诱导条件下的本底表达;而重组载体(不诱导)负对照则有助于判断诱导的效果以及排除诱导剂对宿主菌潜在的干扰,或者是区分细菌内源和外源表达产物——偷懒可不是好习惯,会影响结果判断。注意,接种表达和接种做感受态都类似,一定要用挑单克隆、加足量抗生素、过夜培养的新鲜菌液转种最好,在筛选压力下生长旺盛的种子液远比经过4℃保存的菌液要好得多,也许是因为保存时间长会导致抗生素失效部分细菌丢失质粒或者其他变化。反正就是一种经验做法。

跑SDS-PAGE的话可以用考马斯亮兰染,它灵敏度在100ng左右;但是不能跟着做Western了。银染的灵敏度在0.1~1 ng;有钱还可以用Sypro Red,灵敏度高还可以继续做Western。

在做过Western Blot仍没有检测到表达带,那么就要开始进行下一步的分析了。首先,看看载体的多克隆位点和片断插入的序列,是否有因为酶切连接而意外引入了转录终止信号。有时载体几经多个实验人员的周转,反复插入片断,或者是粘端相同的不同酶切片断之间的连接,会意外在启动子后面带入终止位点,特别是用到XbaI之类的酶要小心。然后要对测序结果进行确定,确定插入的每个碱基都是正确的,没有意外终止的情况。还有个大家容易忽略的问题:就是要看基因中有没有细菌不常用的密码子——如果有,需要考虑换表达菌株。每种菌株都有自己独特的设计,或者是蛋白酶缺陷,或者是重组酶缺陷,改造的目的都是为了让质粒在细菌中存在更稳定,表达的产物不易被降解。不同的载体要配合一定的菌株使用,像pET系列就一定需要有T7 RNA聚合酶片段整合在细菌中的菌株才可用于表达。采用不同调控机制会使用不同的表达菌株,所以换菌株一定要仔细看过载体的调控方式再换。以Novagen为例,如果使用BL21(DE3)表达不成功的话可以换Rosetta系列菌株,它能够由一种氯霉素抗性的、与pET 相容的质粒提供AUA,AGG,AGA,CUA,CCC和GGA 的tRNA。所以这类菌株能够明显改善大肠杆菌中由于稀有密码子造成的表达限制。有时不明原因的表达蛋白截短(比预期的分子量要小很多)也可能是由于稀有密码子造成的。另外一种可能是不严谨的本底表达产物抑制。

没有发现原则性错误之后,最简单、快捷的就是改变一下表达温度、IPTG浓度。低温、较长时间的表达有利于蛋白稳定、融合表达,低浓度的IPTG可以减少化学物质对细胞的损伤。培养基中的葡萄糖可能会抑制表达。有时表达的蛋白可能比预期的有不同,要认真研究电泳结果。如果尝试改变条件后依然没有表达,可以试试换不同的培养基。除了LB外还有TB、M9等,Novagen公司还有特殊的培养基出售补充各种细菌生长所需营养。

如果还是不行,考虑那么就剩下换换载体或者表达系统了。在换过不同载体,不同菌株之后仍是表达不出来的话,笔者的建议是:放弃吧。有些蛋白是用大肠杆菌无法表达的,或许可以尝试其它的表达系统。毕竟,将构建好的质粒交给细菌后,有些事情是我们不能控制的,未知的。尝试其他的表达系统未尝不是一种办法。不过原核不能表达,转去做真核,也不保险,这时候试试体外表达,会更省事,因为没有细胞生长的限制,更容易得到结果,可能只是花费高些,产量低些。能做出结果是第一需要时,这些就不能计较太多。随后将介绍几个体外表达系统,欢迎留意。

如果你成功表达出来了,首先要恭喜你,之后你仍然可能遇到各种各样的问题。这个很正常,科研的道路是曲折的嘛。

Q1:蛋白表达出来了,但是跑SDS-PAGE时大小不符?

进行SDS-PAGE的时候蛋白的净电荷会影响迁移率。带电量高的蛋白会结合较少的SDS,因此阻碍了蛋白的泳动。富含脯氨酸的蛋白会在SDS-PAGE胶中移动得特别慢。如果蛋白的等电点在5到9之间,并且组成的氨基酸组分没有明显的偏好,那么目的蛋白迁移率与预期相差较远就很有可能不是由于凝胶电泳造成的。我们前面提到过,在很特殊的情况下稀有密码子的问题也会造成表达产物的截短。应加以考虑。

这个时候最好利用C端或者N端的标签进行Western Blot,看是否由于蛋白被蛋白酶降解而导致多条目的条带或者比预期小很多的条带出现。如果排除以上因素仍是无法找出为何与预期大小相差很远,你只能苦命地重头再来。如果蛋白酶过高可以换个缺陷菌株试试。

Q2:蛋白不可溶,怎么办?

许多外源蛋白在大肠杆菌中表达后都是以包涵体形式存在,包涵体是一种致密、不可溶的颗粒。一般情况下,形成包涵体表达产率都很高,并且容易分离,得到比较纯的包含体。包涵体致密的结构有助于防止蛋白酶对它的降解作用,如果毒性较强的蛋白形成包涵体也就不会对细胞产生太大的损伤。如果你表达蛋白的目的是为了作为抗原制备抗体,那么出现包涵体也不算太坏,可以用PBS将包涵体悬浮,使用佐剂将溶液乳化后注射进入动物体内进行免疫。

包含体的形成据分析原因之一在于表达量过高,表达产物来不及折叠为活性形式——多数以高表达见长的表达系统都会得到包含体产物。如果融合表达含有标签,常用的做法是将包涵体用尿素溶解后在变性的情况下进行纯化,然后复性。复性是表达下游最折磨人的步骤,以后会逐步介绍。但是,在那之前你应该还要确定一下,你的蛋白真的是不可溶吗?细胞裂解是否完全呢?利用相差显微镜或者染色后对细胞裂解物进行观察。是否仍可以看到完整的细胞?裂解后的沉淀是否和之前收集细胞沉淀大小相似?裂解后溶液是否看起来澄清?以上任何一种情况出现都可能意味着细胞没有被彻底裂解而导致裂解上清检测不到产物。如果形成了包涵体,在比较高倍的(>400×)光镜下可以观察到大肠杆菌中有致密的结构。因为包涵体可能会占据细胞一半体积。

Q3:必须要可溶的蛋白,你可以怎么做?

如果你希望得到能行使功能的蛋白,那么就最好还是想办法使蛋白以可溶形式表达,包涵体复性也是一条十分曲折的道路。避免包涵体形成的方法很多,比如:选用表达量不高的表达系统,选择有助于可溶性表达的融合表达系统比如pThio,pMal等等,对于T7系统来说降低或者减少诱导条件(例如降低ITPG浓度减少T7聚合酶)从而降低表达速度,使用基本培养基等也有助于可溶性表达。另外一个容易忽视的问题是大肠杆菌内还原性过高会导致二硫键不能正确形成,同样容易导致表达产物不溶,更换菌株例如Novagen的Origami系列也有助于解决这个问题。将在随后专门介绍几种特殊的用途的大肠杆菌菌株,不妨留意。

一般包涵体可以先使用温和变性剂(如:低浓度的尿素)和去污剂(如:Triton-X 100)将包涵体初步洗涤,之后用8M尿素将包涵体溶解。可以通过透析复性、或者是在过柱的时候复性。复性条件每个蛋白都是不一样的,所以是一条需要摸索前进的道路。

有人尝试当蛋白挂在柱子上的时候,在还原和氧化的谷胱甘肽存在的情况下用浓度从6M到0M的盐酸胍过柱,促使蛋白的折叠。在蛋白重新折叠后用咪唑洗脱。

Q4:切除标签时引入的蛋白酶是否一定要切除?

很多时候我们要用蛋白酶除去加入的标签(除了NEB出有内含肽自动断裂这种模式就不需要蛋白酶了),在蛋白酶切除标签后是否一定要去除呢?有人认为蛋白酶与目的蛋白加入的比例是1:500甚至更低,蛋白酶是不会影响到下一步操作的,在一些粗放的生化实验不用去处蛋白酶。严谨的后继实验需要将蛋白酶除去。很多公司已经开发出带有标签的蛋白酶,使得仅通过过亲和柱就可以方便的去除蛋白酶和融合标签,令实验越来越方便了。

回到开篇的第一句话,成功的试验大多都是一样的,而失败的试验就各有各的不幸。想把试验中出现的所有问题都总结出来是不大可能的。

 
Leave a comment

作者 on 2011/08/31 在 biology (生物)

 

标签:

【转】黑莓os 5.0 工程模式下开启U盘功能-大容量模式

黑莓OS 5.0下和电脑连接时不能显示出U盘的分区,内存和媒体卡都识别不出,即使手机内存设置中已经选择了大容量模式。其原因就是手机工程模式中大容量模式已被关闭。下面来介绍一下在工程模式中开启大容量模式的方法,让电脑能够识别出手机的内存和媒体卡。

工作的内容就是两部分:1、进入工程模式;2、开启大容量模式

1、开启工程模式(方法是在”help me”界面下输入“工程模式解锁码”)(注意:除了下边的方法,用BerryBox可以更快的获得工程模式解锁码

1.1 首先在BB9000的主屏幕上同时按下 alt+shift+H,调出”help me” 界面。(shift键在我的键盘上是为”aA”,即是大小写转换键)

1.2 注意该界面中所显示的三项数据:系统程序版本(App Version)、PIN和运行时间(Uptime)

1.3 打开网页 http://www.bber.info/escreen.htm ,将上面的三组数据填入表格中,点击”Generate”计算解锁码。

PS1:其中程序版本填写需要注意,比如我的版本是5.0.0.771 (1301),那么填写时注意771和后面括号间应该有一个空格,另外空格和括号必须是英文格式的,不要写错。
PS2:Duration是工程模式的持续时间,建议选择1天,工程模式一旦生效,它会取代”HELP ME”界面,这个就是它取代的时间长度。

1.4 在步骤1.1的”help me”页面下输入步骤1.3得到的解锁码,即可进入工程模式。

PS:输入时注意字符和数字的切换。如果输入不成功则退出重新填写,但需注意,再次进入”help me”时运行时间已经改变,需要根据新的数据重新计算解锁码。

2、修改相关设置(这里强调工程模式下有大量的调整参数,本文仅指导大容量模式的修改,因修改其他内容而引起的问题,概不负责)

2.1 在工程模式的首页菜单下(Engineering Screen Contents),依次进入OS Engineering Screens >> USB >> USB Port Information,如果没有开启大容量模式,那么此页面第四行信息,应该显示的是 Mass Storage(MS)DISABLED,按下轨迹球修改,选择Toggle MS,该项变为 Mass Storage(MS):ENABLED,(大容量存储:可用),修改完毕后,可按下返回键一路返回,退出工程模式。

2.2 确保手机的 选项-内存中已开启“大容量存储模式”,将手机连接到电脑后即可检测到内存和媒体卡了。

 
1 Comment

作者 on 2011/05/30 在 blackberry (黑莓)

 

标签:

基因克隆软件NoeClone3.0全功能基础版、高级版本免费申请

       为了推动中国生物正版软件的应用,促进中国生物科学技术、生物产业的发展,中国诺京生物信息技术有限公司从五月一日起特别针对中国生物科学教育机构、科研机构限期一年免费开放旗下世界先进的基因克隆软件NoeClone 3.0基础版、高级版;您只需要向诺京公司(中文网站)提交一份申请,便可以免费下载使用NoeClone 3.0全功能基础版和高级版。

       诺京的新一代分子克隆软件NoeClone,从第一代1.0版本到现在的最新3.0版本广泛应用到美国NIH、悉尼大学、台湾中央研究院、上海师范大学等国际国内各大研究机构。在此,我们非常感谢所有使用NoeClone的用户对诺京一如既往的支持,同时,也希望我们的软件在生命科学研究领域给予您们更多的支持与帮助。

特别感谢以下主要合作伙伴:
>NIH
>Cellex Inc.
>Genomics Research Center, Academia Sinica
>School of Veterinary and Biomedical Sciences, James Cook University
>Office of Information and Technology, Wheaton College
>Department of Pharmacology
>MMSB, Uconn health center
>University of Ottawa-Faculty of Medicine
>Department of Marine Sciences,University of Puerto Rico, Mayagüez
>ORIGENE

如果您有兴趣,请登录http://www.noegen.com/freedownloading.php免费申请,如果您有任何的疑问,请致电023-63118867,或者发送邮件到info@noegen.com

诺京生物
二0一一年五月一日

NoeClone独有新颖的特征:

       NoeClone为虚拟克隆,凝胶电泳模拟,质粒绘图,序列分析和克隆数据的管理提供了更为强大,更为综合的解决方案。NoeClone把复杂的分子克隆过程变成了一种愉快的工作经验。NoeClone拥有强大的生物分子图形化设计功能,方便分子生物学家在计算机上充分享受操作分子和实际序列图谱的乐趣。

NoeClone的几点重要功能:

• 互动的绘图界面。图片图谱是完全互动的,是可以进行任意操作的绘制程序。

• 直观的虚拟克隆。虚拟克隆设计象征着实际在实验室里的克隆过程,它伴随着高级的克隆操作,例如修改片段末端、添加接头、电子PCR,高通量克隆,TOPO克隆和Gateway克隆。

• 精美的质粒绘图和克隆流程图模拟。质粒图谱编辑支持多图谱编辑,让克隆流程图的创建更加简单好用。

• 高级的序列修饰。NoeClone整合了SeqCorator的功能,可以十分灵活的修饰特征。

• 凝胶模拟。一个综合的凝胶模拟器可以用来展示消化模式和克隆片段的凝胶分离条带。

• DNA序列分析。在NoeClone创造的环境中,您能结合精确的数据管理做大量的生物信息数据分析。分析结果不但能用图形化界面展示出来,还能拥有详细的文档输出功能。

• 多序列比对。 NoeClone可以对FASTA格式的多序列进行比对,也可以直接调取数据库中的序列进行比对。

• 数据管理。克隆质粒的信息和克隆步骤可以通过相关的数据库分开保存或者集中保存,软件为公司或者实验室克隆数据的管理提供了一个有效的必要的解决方法。

文末提供下载链接,请勿用于商业用途,如有侵权,请告知博主,谢谢。

 
Leave a comment

作者 on 2011/05/19 在 biology (生物)

 

标签:

常用生物在线分析工具及分子生物学软件简要功能介绍

综合工具
BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)
http://www.bionavigator.com

功能最为完整的网上服务器。包括核酸的酶切位点、motif、开读框等搜索,PCR引物设计,二级结构预测,多序列比较及分子进化树构建,等等;蛋白分析 则包括酶切图谱,功能区搜索,分子进化分析,蛋白二级结构预测,等等;此外还提供序列管理等功能。收费站点,但提供两周的全功能免费试用期
http://bioinformatics.weizamann.ac.il/gdp/gdp.html, 另一个综合性的提供序列分析功能的网站
http://www.hgsc.bcm.tmc.edu,内容丰富的站点,有数据库及教程、在线分析工具等,常用其预测编码区、搜索启动子和结合位点等功能

编码区统计特性分析
http://cbrg.inf.ethz.ch,常用其基因预测及验证功能,预测DNA序列的外显子。 还有其它一些在线服务
启动子及调控元件分析
BDGP-promoter
Tfsitescan
内含子/外显子剪接位点
NetGene服务的Email地址是:netgene@cbs.dtu.dk
重复序列分析
CENSOR的Email服务地址是:censor@sharon.lpi.org
XBLAST:ftp://ncbi.nlm.nih.gov/pub/jmc
Repbase:ftp://ncbi/nlm.nih.gov/repository/repbase/REF
从氨基酸组成辨识蛋白质
ExPASy:http://www.expasy.ch/tools/
PROSEARCH:http://www.embl-heidelberg.de/prs.html
预测蛋白质的物理性质:等电点、分子量、酶切特性、疏水性、电荷分布等
ExPASy:http://www.expasy.ch/tools/,有较多的蛋白分析工具,包括分子量、亲疏水性、表面积、二级结构、与SWISS-PROT数据库收录分子同源性比较、极性、折射率等分析
FASTA:ftp://ftp.virginia.edu/pub/fasta/
SAPS:http://www.isrec.isb-sib.ch/software/SAPS_form.html
跨膜区预测:http://www.isrec.isb-sib.ch/software/tmpred_from.html
蛋白质二级结构预测
nnPredict:http://www.cmpharm.ucsf.edu/~nomi/nnpredict.html
PredictProtein:http://cubic.bioc.columbia.edu/predictprotein/
PredictProtein的国内镜像:http://www.cbi.pku.edu.cn/predictprotein/
SOPMA:http://pbil.ibcp.fr/
二级结构预测:www.cmpharm.ucsf.edu/~nomi/nnpredict-instrucs.html
卷曲螺旋预测
COILS:http://www.ch.embnet.org/software/COILS_form.html
跨膜区段和在膜上的取向预测
TMpred:http://www.ch.embnet.org/software/TMPRED_form.html
信号肽的剪切位点
SignalP:http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/
蛋白质的三维结构
SWISS-MODEL:http://www.expasy.ch/swissmod/SWISS-MODEL.html
CPHmodels:http://www.cbs.dtu.dk/services/CPHmodels/

分子生物学软件简要功能介绍

     在进行分子生物学研究时,常需要用到各种计算机软件。这些软件种类不少,功能大致相同,到底使用哪个,其实可根据各人的使用习惯来选择。下列的软件,大部 分可在网上找到全功能的版本或各种演示版或试用版,只要以软件名为关键词用搜索引擎搜索就可以了。网上也有此类各种软件的总结。下面为此类软件的简单介绍:


1.三维分子类 2.DNA分析 3.RNA分析 4.蛋白质分析
5.生化教学 6.生化工程 7.序列格式转换 8.引物分析
9.序列综合分析 10.进化树分析 11.质粒绘图 12.图像处理
13.数据处理 14.检索与阅读 15.基因芯片 16.其他功能软件
17.化学绘图 18.化学应用 19.在线综合工具 20.在线蛋白工具
21.RNA analysis 22.在线引物设计

1.三维分子类

RASMOL:观看生物分子3D微观立体结构

RasTop:为RasMol 2.7.1的图形用户界面软件

CHIME:直接在浏览器中观看3D分子

MolMol:将pdb等格式的蛋白文件通过微调,存成普通的图形文件

raswin.exe.gz:rasmol(win)2.7.0.1 rasmol新版本及汉化版本

CrystInfo:用来快速、容易地构建、观察与检查晶体3D结构

PDViewer:PDB格式文件的查看程序

Weblab Viewlite:三维分子浏览工具及大量分子文件例子

Weblab ViewerPro:三维分子浏览工具

ICMLite:三维分子浏览工具,有一些其他软件没有的功能

VMD:三维分子浏览工具,可以进行动态显示

CN3D:3D分子结构观察软件

WPDB:PDB文件检索显示分析软件

DTMM:三维分子模型显示、编辑与构建程序

Mole:高性能的大分子三维图形显示计算工具

gopenmol:显示并分析分子结构及其特性

POV-Rayv:生成三维图像工具软件

MolPOV:将PDB文件转化为POV格式文件的软件

Mol2Mol:分子文件格式转换软件

PovChem:将PDB文件转化为POV格式的文件

Ortep-3 for Windows:生成分子的热椭圆形点图

PLATON:通用结晶学软件工具

Mage:读取并演示Kinemage格式文件的专用软件 Prekin :将PDB格式文件转换为Kinemage格式文件

Swiss-Pdb Viewer:PDB文件显示与分析软件

DINAMO:蛋白序列排队比较编辑与三维模型构建工具

PCMoleeule2 Lite:查看PDB格式文件的免费软件

StrukEd :化学分子编辑与三维模型生成软件

JMVC:使用JAVA技术编写的三维分子查看器

ReView:读取及分析XYZ格式三维分子文件

Oscail:用来处理、定义与检查小分子单晶的软件包

Moilin:分子构建与观察软件

Tinker:与Moilin配套的DOS下的分子设计建模

Biodesigner:免费的分子建模与显示软件

MoluCAD:全功能的分子建模与显示工具软件 Viewer Activex Control:三维分子显示控件

MarvinView:JAVA语言编写的化学分子二维与三维显示程序

ACD/3D Viewer for ISIS:免费的ISISDraw三维显示插件

Amira:高等三维显示建模系统

AmiraMol:Amira 2.3 相应的显示三维分子的增强工具

Visualize:分子建模和研究软件包

ScientificGL:C++OpenGLAPI三维分子开发工具

Sojourner:找出小蛋白的最小能量构形并实时演示的软件


2.DNA分析

DNAClub:DNA处理软件

JaMBW:分子生物学软件包

DNATool:功能很全面的DNA序列分析工具包

pDRAW:DNA分析与绘图软件,可绘制线性或环形DNA图

ANNHYB:用来帮助进行PCR引物设计与基因探针设计的软件

RESTRICTION ANALYSIS:限制酶消化工具

ABIView:ABI格式文件显示与编辑软件

Chromas:ABI格式文件显示与编辑软件

Sequence viewer:获取与观察从GSDB获取的DNA序列数据及其关联特性的工具

DNAssist:DNA序列分析工具

DNAProbe:核苷酸序列设计工具

DnaSP:DNA序列种群遗传学分析软件

DFW:DNA分析软件

Artemis R4:以Java语言写成的序列查看工具 ’

ACT R1:以Java语言写成的序列比较查看器

GDA:主要用来进行不连续基因数据的统计分析 RDP:从一组排队比较(Align)的核酸序列中查找潜在的重组体软件

Sequencher:装配DNA小片段为大的连续序列或毗连(序列)群”Contig”软件

MehCalc:自动计算DNA序列热力学数据的Excel电子表格宏软件

基因探索者:中文界面的功能集成、高效、快捷的基因分析软件

ConsInspector:DNA蛋白结合位点预测识别软件

MatInd与Matlnspector:快速匹配DNA序列与已知共有序列的软件工具

GBuilder:JAVA语言编制的用来分析与显示DNA序列的软件

GenomePixelizer:帮助理解基因组中的簇基因(C1ustermggene)之间的相互关系的软件

LabBook Genomic XML Viewer:图形化显示并处理GenBank序列数据的免费软件

Gene Construetion Kit 2 :管理并显示克隆策略中的分子构建过程软件

Genalysis:比较基因组或大量基因序列的工具软件


3.RNA分析

RNAdraw:RNA二级结构分析软件

RNAstructure:预测RNA 级结构图

RnaViz:RNA二级结构图绘制程序


4.蛋白质分析

ANTHEPROT:蛋白序列分析软件包

pSAAM:蛋白序列分析软件包

VHMPT:螺旋状膜蛋白拓扑结构观察与编辑软件

aminoXpress:免费的多功能蛋白分析软件包


5.生化教学

mmp.zip:将生化代谢中的各种途径用图表的形式表示出来

linpath.zip:线性酶反应模拟软件

protlab:蛋白质纯化仿真软件

MOLMED.ZIP:生化基础概念演示教学程序

Biochem:生化教学文件

photo:光合作用教学程序

Adrenalin:肾上腺素在肝糖原代谢中的作用演示

Virtual Cell Lab:多媒体细胞生物学教学程序


6.生化工程

brd.zip:生物反应器(发酵罐)设计软件

BioStat:BioStatB发酵罐控制程序

PenSimv:青霉素发酵模拟软件

BioProSim:发酵实时模拟软件


7.序列格式转换

vised:序列输入分析和格式转换软件

ForCon:多序列文件格式转换软件

SeqVerter:序列格式转换软件

GeneStudio LE Version:序列格式显示、编辑与转换工具软件

FASTA/BLAST SCAN:FASTA与BLAST查询输出文件的处理软件

RevComp:序列格式转换软件


8.引物分析

primer Premier 5.0:引物设计工具

Oligo:引物分析著名软件

Primer Designer:专门用 pASK-IBA~pPR-IBA表达载体免费的引物设计辅助软件

Array Designer:批量设计DNA和寡核苷酸引物工具

Beacon Designer:PCR定量分析分子信标(Molecularbeacon)设计软件

NetPrimer:基于WEB界面的引物设计程序


9.序列综合分析

pcgene:分子生物应用软件 MACAW:多序列构建与分析软件

Clustal W:用来对核酸与蛋白序列进行多序列比较的软件

Clustal X:ClustalWWindows界面程序

FASTA:数据库中查找同源序列软件

GeneDoc:对序列进行相关分析等操作

BLAST与Blastcl3:数据库中查找类似序列的软件及客户端软件

SeqPup 0.9:生物分子序列编辑与分析软件

K-Estimator 5.5:进化基因学研究软件,评估两条核酸序列核苷酸替代数

BioEdit:序列编辑器与分析工具软件

DAMBE:综合性序列工具软件

LaserGene:综合性序列工具软件

SeaView:图形化多序列队列编辑器 Jalview:用Java语言写的多序列队列编辑器

DNASIS:序列综合分析工具

Genamics Expression:是一个DNA与蛋白序列分析工具

Vector NTIViewer:载体查看软件

Jellyfish:多功能序列分析软件

ProSeq:核酸序列编辑与种群遗传学分析软件

Gap4 database viewer:Gap4基因装配数据库读取显示软件

SMS:DNA与蛋白序列分析与格式化在线工具集合

Omiga:核酸与蛋白序列综合性分析软件

Staden:综合序列分析工具软件包

Vector NTISuite:综合性蛋白核酸分析工具包

INCA:Java脚本语言写成的BLAST服务器客户端程序

ISYS:NCGR开发的用JAVA语言写成的数个不同类生物信息软件与数据库的软件集合平台

DNA Scriptor:DNA与蛋白序列综合分析软件

Sequence Quickie-Calc:非常紧凑的分子生物学工具软件

PhyloGrapher:用来显示与研究相类似的基因与蛋白序列之间的进化关系的软件


10.进化树分析

phylip:进化树分析软件,并可绘制进化树

TreeView:进化树处理软件

GeneTree:比较基因与种系进化树的程序

NDE:用来编辑NEXUS格式文件的程序

TreeMap:用来可视化地比较主、从进化树的程序

Spectrum:分析进化信息而不用将之转化为进化树的软件

Phyltools:计算与处理进化树数据的软件

tree-puzzle:核酸序列、蛋白序列相似性分析及进化树构建工具

ATV:JAVA语言编写的显示”New Hampshire”与NHX格式的进化树文件软件

TREECON:构建和绘制进化树的软件包

ProBiosys比较表现型分类法数据和分析计算核酸序列数据距离值的软件


11.质粒绘图

Plasmid Processor:绘制质粒图软件

Plasmid ProcessorPro:绘制质粒图软件,与Plasmid Processor是同一个作者

WinPlas:质粒绘图软件商业版

DMUP:环状质粒绘图软件测试版

Plasmid Toolkit:质粒绘制软件

pDRAW:DNA分析与绘图软件,可绘制线性或环形DNA图

Redasoft Visual Cloning:是有名的绘制质粒图Redasoft Plasmid 1.1软件的升级版

SimVector:质粒图绘制软件


12.图像处理

Image Tool:科学用途的处理图像软件

Image J:用Java语言写成的科学用途的处理图像软件

Cross Checker:基因指纹图分析软件

ALFmap:ALF(Amersham Pharmacia)图像格式转换软件

Band Leader:凝胶图像处理软件

Scion lmage:图像处理与分析工具

OSIRIS:通用医学图像处理与分析软件

Melanie 3 Viewer:免费Melanie图像查看器

Smart Draw:流程图绘制软件演示版

GIMPWin:图像处理自由软件

ChromoZoom:比较两个图像的相同与不同之处软件

bandscan:蛋白凝胶电泳图像分析软件

SigmaScanPro:图像分析软件30天全功能演示版

SigmaGel:凝胶图像分析软件

TotalLab:图像分析软件

Lablmage:凝胶图像分析软件

GelDiff:定量比较两个2D凝胶图像的不同之处的JAVA软件

Timediff:分析蛋白/基因表达图谱时间序列的JAVA软件

QuantiScan:使用简单功能专一的凝胶扫描、分析软件

PDQuest:分析2维凝胶并生成数据库的标准软件


13.数据处理

CurveExpert:用于ELISA标准曲线拟合的软件

Cliekh Graph:实验数据作图软件

Statistica:专业统计软件

GraphPad PRISM:著名的数据处理软件

NoSA:中文非典型数据统计分析系统

CrossGraphs:多变量数据库图形显示软件

SigmaPlot:绘图和数据分析软件包30天全功能评估版

SYSTAT:数据统计分析与作图的利器30天全功能演示版

SigmaStat:智能统计软件30天全功能演示版

PeakFit:自动分离、拟合与分析非线性数据软件

TableCurve:自动两维曲线拟合与经验公式查找软件

TableCurve :自动三维曲面拟合与经验公式查找软件

SPSS:非常权威且有名的数据统计处理软件30天全功能演示版

Origin:易于使用的科学用途数据绘图与数据分析处理工具软件

DATb:进行生物曲线拟合与数据分析的免费软件

数据作图助手:对实验结果进行数据分析和作图的专业软件


14.检索与阅读

PatentIn:用于将序列专利提交给美国国家专利与商标局的辅助软件

Checker:用于将序列专利提交给美国国家专利与商标局的辅助软件

ica32t.exe:中国生物学文献数据库检索客户端软件

PathDB检索程序:(代谢途径数据库)检索程序

PubCrawler:Medline文献库与GenBank核酸序列库检索软件

NetRoseBrowser:PDG格式浏览器

Book Express:专门用于超星数字图书下载的工具软件

EndNote:专业参考文献查询软件

Reference Manager:专业参考文献查询软件

Procite:参考资料检索管理软件

Sequin:数据库GenBank,EMBL,DDBJ查询软件

MiniViewer:数图阅览器

Compresslt:JBG(NLC)”JPG转换功能软件

Refs:参考文献管理软件

Scholars Aid:文献参考资料等日常资料的整理软件

paperworks:免费的参考文献管理软件

KD:知识仓库建库管理系统


15.基因芯片

AMADA:用来组织、研究、显示、分析微数组(Microarray)数据软件

ScanAlyze:进行微矩阵荧光图像分析软件

Cluster:对大量微矩阵数据组进行分析处理的软件

TreeView:用图形来显示Cluster软件分析的结果软件

AMAD:微数组数据库

ArrayMakerv:Stanford大学Brown实验室提供的基因芯片研究全套设备相配套的软件与文档

J-Express:分析微矩阵(Microarray)实验获得的基因表达数据的软件


16.其他功能软件

digitizer:图形数字化软件,可以将曲线图转化为数据与等式

Graph Paper:坐标纸打印软件

DynaFit:酶动力学数据或配体—受体结合数据处理软件

Migrate:从遗传学角度,估算人口移民率程序

arlequin:人口遗传学软件

正交设计助手:正交实验设计辅助工具软件

FBAT:家族遗传相联检验的统计程序

GGT32:图形化基因型表示软件

CERVUS:使用共显性标记数据推断亲缘关系的软件

Jarnac:代谢过程模拟软件包

Gepasi:化学与生物化学反应动力学仿真与优化软件

BCT:微生物趋向性模拟程序

StochSim:随机生物化学反应模拟软件

Bio_MW:生物化学分子量计算软件

MatchCode:将蛋白和核酸序列进行简单匹配和格式化输出的中文软件

Map Manager:回交、杂交与重组自交系分析遗传作图实验结果的软件

MolEco:以遗传学方法评估杂乱交配频率的软件

Canvas:绘图软件

免疫室管理系统:中文免疫室综合软件

Cyrillic:家谱绘图软件

Frozen Cell Stock Monitor:用来管理储存在液氮容器中的生物样品(例如细胞系、血清等等)的程序

MICE:虚拟动物饲养设施,用来帮助管理饲养设施中的实验动物软件

DBsolve:代谢及酶—受体结合模拟软件

boxit:管理生物样品的数据库系统

GRR:检测系谱误差(pedigreeerrors)的应用软件

健康药霸:药典类的软件

AceDB:基因组数据库软件

MAPL98、DIAL98与GEST98:El本学者编制的几个统计基因学(StatisticalGenetics)软件

PED:系谱(Pedigree)绘制软件

PEDRAW:系谱(Pedigree)绘制软件

quantiRT:内置宏程序,用来辅助定量RT-PCR实验的Excel文件

BateView:管理与追踪小型的实验鼠生殖群体的Excel文件

MassXpert:帮助科学家预测与分析从蛋白组学研究中获得的蛋白质质谱数据的软件

MestRe-C与MestRe-CnD:分析、显示与仿真1D与2D磁共振图谱的软件

ACD/SpecViewer:免费光谱数据显示软件

ACD/CNMR Viewer:ACD/HNMR用来显示ACD/NMR Predictors预测的所绘化学结构式

Viewer:磁共振图谱文件的免费软件

WinMDIver:分析流式细胞仪数据文件的免费软件

TestDNA:根据已知成分值生成细胞周期FCS文件的免费工具软件

Cylchred:细胞周期分析(CELLCYCLEANALYSIS)软件

gX-Path Vision:生成、编辑与显示生物代谢途径的工具软件

生物五笔:生物医学专业输入法


17.化学绘图

ACD/CHEMSKETCH:绘制分子结构的免费软件及其汉化版

ACD/ChemSketch及ChemBasic:绘制分子结构的免费软件5.0版本及其汉化版

Chemfont:化学符号与TureType字体,可以在Word中直接插入文章中

clip.zip:化学图片集,含有近400幅与化学有关的GIF图片

ISIS DRAW:绘制化学结构式的免费软件

AutoNom:ISIS/Draw软件的插件(自动生成符合IUPAC命名规则的化合物名称)

ChemWindows:绘制化学结构式的免费软件

MarvinSketch:JAVA语言编写的小巧好用的化学结构式绘制程序

ACD/Structure Drawing Applet:绘制化学结构式免费JAVA小程序

ChemPen:绘制化学结构式软件

ChemPen+:绘制化学结构式软件

ChemPen:绘制化学结构式软件


18.化学应用

mmcalc.exe:分子量计算器

hxfc.zip:化学方程式配平软件

cmcalc10.exe:化学试剂制备计算器

alkne.exe:有机化学命名练习程序

chembl32.zip:Windows95下的免费化学方程式配平程序 periodic.zip:小巧的元素周期表

ptab32.zip:高级元素周期表

CAF:计算机辅助配方软件

CFT:化学式教师

元素屋:查询112种元素的各个信息的中文软件

化学反应方程式编辑器:制作化学反应方程式、离子方程式、分子式、离子式等

CRS:化学反应方程式配平器

Model ChemLabv:化学实验教育软件及其汉化版

periodic.exe:免费的元素周期表

化学品电子手册:一个综合性的化学品手册


19.在线综合工具

Biology Workbench:基于WEB的生物学综合工具

sewer:网上常用在线工具集合,本地版


20.在线蛋白工具

BCM Search Launcher:蛋白序列二级结构预测综合站点

DAS:蛋白跨膜预测服务器、输入蛋白序列,预测跨膜区域

TopPred:蛋白预测服务器提供的膜蛋白拓扑学预测在线工具

SOSUI:膜蛋白分类和二级结构预测在线工具

PSIpred-MEMSAT:进行二级结构预测与跨膜拓朴结构预测

HMMTOP:预测蛋白序列的跨膜螺旋与拓扑结构服务器

SMART:提供蛋白序列,在结构域数据库中查询/显示出其结构域及跨膜区等

TMpred:预测蛋白序列跨膜区

TMHMM:预测蛋白的跨膜螺旋

The PredictProtein server:提供蛋白数据库查询,预测蛋白各种结构的服务

SPLIT:膜蛋白二级结构预测服务器

PRED-TMR:提供基于SwissProt数据库统计分析的预测蛋白跨膜片段的服务

CoPreThi:基于INTERNET的JAVA程序,预测蛋白的跨膜区

TMAP:提供预测蛋白跨膜片段的服务


21.RNA analysis

Pattern Search and Discovery:巴斯德研究所提供的常用RNA在线分析工具

DNA sequence analysis:巴斯德研究所提供的常用特征序列查询工具

Search Genes and Coding Regions:巴斯德研究所提供的常用DNA在线分析工具

Oligonucleotide Calculator:巴斯德研究所提供的基因与编码区查找工具

解链温度计算器:JAVA语言写的寡核苷酸计算器,给出核酸序列,计算GC百分比、解链温度、长度、分子量。
可以下载后使用,当小计算器

BCMgene-finder:核酸序列查找服务器,提交核酸序列,选择相应的数据库,进行序列查找


22.在线引物设计

The Primer Generator:在线引物设计程序

Prime3:比较有名的在线引物设计程序

 
Leave a comment

作者 on 2011/05/19 在 biology (生物)

 

标签:

2011年梨园春游

早就计划组织一次春游一直没有机会,终于在这个周末我们行动了,基本上整个实验室的人一起杀到了比较近的东湖公园和梨园。岸边垂柳,绿树成荫,天气晴朗,微风拂面,徜徉其间,甚是惬意。虽然随身携带了数码相机,但是还是忍不住把手机拿出来闪耀了一把,机型:黑莓9520。废话少说,直接上图。

 
Leave a comment

作者 on 2011/04/09 在 生活

 

标签:

解决黑莓断网可能方法之一

黑莓断网一直是众BBer的心头痛,文中给出一种可能的解决方法,由于各地运营商情况不同,所以有没有用还需大家自己测试,不保证一定有效果。

方法如下:

1. 打开“选项”-“移动网络”-按黑莓键,点击“诊断测试”

2. 按黑莓键,点击“运行”,运行完成之后,可以看到“IP地址”选项,记下地址。

 

3. 打开“选项”-“高级选项”-“浏览器推入”,去掉“启用WAP推入”前面的勾;将“服务加载”下拉选项的“IP主机”设置为“允许特定”,在下边输入第2步的IP地址。

4. 保存,退出。 接下来自己测试。

注:此方法来自网络,非原创。

 
Leave a comment

作者 on 2011/04/07 在 blackberry (黑莓)

 

标签:

梦境记录之处女篇

昨晚一夜未眠,一直在梦中度过,脑子转的比白天还累。

在梦中,我竟然TM的穿越了,穿到了2022年。穿越也就罢了,竟然穿越到日本去了(梦中以为是日本,但是其实是韩国,因为有人在说 안녕하세요(安宁哈塞哟) ),到日本(或者韩国)也就罢了,去的原因竟然是因为地球上其它陆地都已经毁灭了,悲剧地为什马是TM的小日本(或者棒国),而不是中国或者其它国家呢? (本人绝对得木有哈日哈韩呐,为什马是日本或者韩国呢?)

除了本人当先锋到了日本之外,接着整个实验室的人都跟随了我的脚步,神马情况? 神马情况? 陈老师竟然说自己被评为宇宙第一博士长(这是什么职位),柯同学竟然还带了一条狗随行,好像还给我带了一条鱼。太诡异了!

都说日有所思,也有所梦。 我看不出白天的我想象力有这么丰富啊。。。要真有这么丰富的话,我都可以写小说了。 怪哉怪哉!

本人准备将以后梦境中之事逐条记录,以后连起来说不定能成为一部伟大的小说呢,哈哈~

就让此文章成为梦境记录之开天辟地第一篇吧。

 

 

 
Leave a comment

作者 on 2011/04/07 在 生活

 

标签:

今天是个诡异的日子

今天碰到很多诡异的事情:

诡异之一:师弟的电饭煲放在宿舍无缘无故就失踪了,翻了个遍都没有找到,如果说是被偷了吧,放在电饭锅一起的很多值钱的东西又都没丢,诡异。

诡异之二:中午吃饭坐电梯下楼的时候,电梯在每一个楼层都停了一次,而每次电梯外边都没有人,真诡异。

诡异之三:(这也算悲剧吧)今天做实验老是出差错。其一是昨天PCR的条带师兄给帮忙回收的,结果今天酶切完毕发现昨天回收有哪一部做错了,导致酶切白做了;其二是今天PCR的结果电泳,平时跑35Min最多只跑了大半,结果今天35分钟竟然跑出去一大截,PCR白做了,得重来。

今天是个什么日子啊,清明就得这样啊? 有木有!!!有木有!!!我伤不起啊!!!

 
Leave a comment

作者 on 2011/04/05 在 生活

 

标签:

 
加关注

Get every new post delivered to your Inbox.